1. 微生物(或酶)转化反丁烯二酸生产L-苹果酸
短杆菌、黄色短杆菌和产氨短杆菌等微生物均能使反丁烯二酸转化为苹果酸。先将原料反丁烯二酸与碳酸钙反应生成反丁烯二酸钙,再经转化柱(37℃)作用,生成苹果酸钙,经提取得L-苹果酸,转化率可达98%。
2. 单一菌种一步发酵生产L-苹果酸
米曲霉、寄生曲霉、黄曲霉等微生物能发酵糖质原料生产L-苹果酸,以大米糖为原料,用黄曲霉菌(ASP Flavus UVT3),在500L发酵罐中通风搅拌发酵40h,产酸率4.4%~4.95%,对糖转化率为68%~75%。
3. 混种发酵两步生产L-苹果酸
首先,无根根酶R25在含有12%葡萄糖的培养基中培养以积累反丁烯二酸,然后接种普通变形杆菌P1继续发酵2d,L-苹果酸的产量可达5.2~5.48g/100ml,糖的转化率为86.7%~91.3%。用18%的薯干粉可代替含12%的葡萄糖的培养基,产L-苹果酸可达5.47g/100ml。
发酵液稀释后过滤,清液经减压浓缩、冷却结晶得苹果酸钙,用硫酸酸解得L-苹果酸,并用732树脂交换,洗脱液再用301阴离子树脂交换得苹果酸清液。最后经减压浓缩、冷却结晶、重结晶得成品。
反应流程:
4. 1. 从不成熟的苹果中单离出苹果酸;工业上主要用苯经催化氧化生成顺丁烯二酸酐,然后再高温高压下与水反应制取。